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          上海研域帶您了解ELISA試劑盒實驗詳細步驟

          發布時間: 2023-07-18  點擊次數: 553次

          ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。

          ELISA試劑盒包含預包被酶標板、檢測抗體、鏈酶親和素標記的HRP、標準品、標準品稀釋液、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測緩沖液等10個成分。

          實驗前,請將試劑盒、樣本取出;室溫放置半小時,恢復至室溫。

          第一步:ELISA緩沖液配制

          吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液,至50ml離心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸餾水至1000毫升。

          第二步:標準品溶解和稀釋

          取出標準品,2000rpm 離心2分鐘,以便管壁上的粉末集中到管底,根據標簽,加入一定的蒸餾水,蓋上蓋子,渦旋震蕩5秒,靜置10-30分鐘至粉末溶解,準備8個1.5毫升的EP管,標注S1至S7和空白,用于標準品對策梯度稀釋;

          加入150微升標準品稀釋液,吸取150微升重溶的標準品,至S1中進行2倍稀釋,吹打10次混勻,渦旋震蕩5秒,從S1管中吸取150微升液體,至S2管中,吹打混勻,繼續以上步驟梯度稀釋至S2至S7;

          第三步:稀釋檢測抗體

          檢測抗體為100x濃縮液,所以吸取50微升檢測抗體,至5毫升1x Assay Buffer 震蕩混勻備用;

          第四步:加樣

          取出已恢復至室溫的酶標板,加入300微升洗液,以洗去包被抗體保護劑,使包被抗體處于活性狀態,靜置浸泡30秒。洗板結束后,立即使用酶標板,不要讓酶標板干燥。

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